Качественное определение белка в моче. Определение концентрации белка в моче методом разведения

Моча - это важная биологическая жидкость в организме человека. Большая часть продуктов обмена удаляется именно с ней. У здорового человека ее состав имеет относительно фиксированные значения. При возникновении заболевания некоторые показатели изменяются, что дает возможность лечащим врачам уточнить поставленный диагноз. Выявить проблемы в работе почек поможет анализ суточной мочи на белок.

Анализ суточной мочи или суточный диурез

Это лабораторное исследование, с помощью которого определяют количество выделившейся жидкости за сутки. Такой метод применяется для оценки состояния функционирования почек. Состав урины:

Каждого компонента в норме должно содержаться определенное количество, отклонение от которого считается патологией. При исследовании суточного на белок норма для взрослых мужчин и женщин одинаковая. При нормальной работе почек это вещество не должно попадать в урину или его может содержаться незначительное количество 40-80 мг. Выделение 150 мг и более считается патологией. Однако с возрастом, особенно после 60 лет, допускается небольшое превышение допустимого показателя, и связано это с возрастными изменениями в организме. В некоторых случаях выявление белка объясняется неправильной подготовкой перед сбором биоматериала или погрешностями в питании. У детей норма зависит от возраста, веса и площади поверхности тела.

Общая информация

По результатам лабораторных исследований суточной урины получают следующие сведения:

• Объем жидкости, который выделяется в течение суток из организма. В среднем, он составляет 1750 мл и может колебаться как в меньшую, так и в большую сторону в зависимости от объема выпитой жидкости.
• Сахар. Особенно важен этот показатель для пациентов, страдающих сахарным диабетом.
• Оксалаты. Превышение сверх допустимых границ чревато образованием в почках песка и камней.
• Метанефрин. Это вещество образуется после распада гормонов. Отклонения от нормы в сторону увеличения - это признак патологии почек, сердечно-сосудистой системы и др.
• Белок. У здоровых людей этого показателя не должна наблюдаться в урине. Это один из важных параметров, который выявляется при суточном анализе мочи. Завышенный уровень свидетельствует о признаках патологии почек, болезнях центральной нервной системы. Помимо общего количества белка, лабораторное исследование биологической жидкости позволяет обнаружить и белковые соединения, которые также важны для правильной постановки диагноза.

Показания к назначению анализа суточной мочи на белок

Ввиду того что изменения в качественном и количественном составе урины начинаются раньше, чем симптомы болезни, анализ позволяет своевременно выявить патологию. Показаниями к назначению этого вида исследований у взрослых и детей является наличие следующих заболеваний:

• амилоидоза (нарушение обмена белков);
• сахарного диабета;
• нефропатии, которая проявляется отеками ног;
• ишемии сердца;
• почечной недостаточности.

Кроме того, его назначают при приеме пациентом некоторых лекарственных средств: аминогликозидов, ингибиторов АПФ, диуретиков тиазидного ряда и некоторых других препаратов.

Подготовительный этап

Для большей информативности и получения наиболее объективной информации по итогам анализа суточной мочи на белок следует соблюдать определенные правила, которые обязательны для выполнения и заключаются в следующем:

• За сутки или более исключить употребление витаминных комплексов, антикоагулянтов и диуретических средств.
• За сутки изменить рацион. Отказаться от острой, жирной и сладкой пищи, а также алкогольных и кофейных напитков.
• Не сдавать биоматериал во время месячных.
• Для сбора урины приобрести в аптечном учреждении специальную тару или можно воспользоваться стеклянной банкой, объемом не менее трех литров.

на анализ белка?

Правила сбора биоматериала общие как для взрослых мужчин, так и для женщин и детишек, которые достигли определенного возраста и могут самостоятельно пользоваться горшком.

1. Непосредственно перед сбором урины необходимо выполнить туалет наружных половых органов.
2. Первая порция биоматериала не учитывается. Однако фиксируется время утреннего мочеиспускания.
3. Собирают всю выделяемую жидкость в течение 24 часов. В ночное время также продолжается сбор урины.
4. Тару с биоматериалом рекомендуется хранить при температуре не выше 8 градусов и не ниже 5.
5. Сразу после забора последней порции, собранную мочу следует тщательно перемешать.
6. Предварительно у доктора следует уточнить, как сдавать суточный анализ мочи на белок в лабораторию. Существует два способа. Около 100 мл биоматериала отливают в емкость маленького размера и относят в лабораторию или можно доставить весь суточный объем в большой таре.
7. В случае, когда имеет значение изменение диуреза за сутки, то доктор рекомендует фиксировать объем любой потребляемой жидкости в течение 24 часов.

Как собирать суточный анализ мочи на белок детям до года? Такой вопрос интересует молодых мамочек. При назначении подобного исследования малышам, педиатры советуют приобрести специальное устройство для сбора биоматериала, которое свободно продается в аптеках. Не следует выжимать жидкость из подгузников или ловить момент, когда малыш захочет помочиться.

Протеинурия или белок в суточной моче

Таким термином обозначают высокие показатели белковых веществ в урине. С ее помощью отслеживают работу почек. Различают протеинурию следующих видов. Легкая - не является предвестником заболеваний и возникает по естественным причинам. Умеренная и выраженная - эти виды свидетельствуют о проблемах в работе почек. В этих случаях, кроме белка в суточном анализе мочи, присутствуют такие симптомы, как:

• боли в костях;
• головокружение;
• потеря аппетита;
• сонливость;
• тошнота;
• рвота;
• сильная утомляемость.

Причины появления белка в урине:

• сердечная недостаточность;
• болезни центральной нервной системы;
• гипертиреоз;
• инфекционный эндокардит.

На изменение состава урины указывает ее оттенок, появление белесоватого окрашивания — это признак присутствия альбумина, вещества белковой природы.

Типы протеинурии

Основным фактором, оказывающим влияние на появление в урине белковых соединений, являются неполадки в усвоении этого вещества. Различают протеинурию:

• Канальцевую. При некоторых заболеваниях невозможно или затруднительно всасывание белков.
• Клубочковую. В этом случае белковые молекулы не задерживаются и вместе с жидкостью выводятся. Такое явление характерно при следующих патологиях: пиелонефрит, повреждение почек токсинами, гломерулонефрит.
• Экстраренальная. Присутствуют повреждения мочевыводящих путей, характерные для уретритов, кольпитов и циститов.

Для определения типа протеинурии применяется ее микроскопическое исследование. Далее, при необходимости доктор назначает и другие виды обследований, включающие ультразвук, магнитно-резонансную томографию и другие аппаратные методы.

Белок в моче при беременности. Причины

Белок - это строительный материал, принимающий участие в различных процессах в организме индивида. Выявление его в урине считается признаком развития патологических процессов. Почечные тельца теряют целостность и вместе с вредными веществами в мочу попадает белок, а причиной такого сбоя является воспалительный процесс в почках. Анализ урины позволяет своевременно распознать болезнь, удостовериться в правильной работе почек в самый ответственный и важный период в жизни женщины. Любое, даже самое незначительное выявление белка у беременных в суточном анализе мочи - это признак начала развития патологии. Причинами его появления являются следующие заболевания:

• гломерулонефрит;
• красная волчанка;
• нефрит;
• гипертония;
• диабет сахарный.

А также инфекционные и воспалительные процессы в почках, их травмы механической природы, ожоги, переохлаждения, отравления токсическими веществами или лечение злокачественных новообразований химиотерапевтическими препаратами до наступления беременности.

Безопасная беременность

С целью диагностики заболеваний почек используют простой метод - это суточной анализ мочи на белок. Соблюдение условий для правильного сбора мочи является обязательным для любой женщины в положении.

1. Наружные половые органы должны быть чистыми. Подмываться можно с использованием обычного мыла. Использовать антисептики или травяные сборы запрещено, так как они исказят достоверность результатов.
2. Собирают урину в чистую сухую тару с широким горлом.

В случае обнаружения в моче белка доктор назначает лечение, которое защитит плод от отрицательного влияния заболевания, ставшего причиной появления веществ белковой природы в урине. Далее следует выяснить причину этого явления. В большинстве случаев она кроется в нарушении работы почек. Появление белка в биоматериале во второй половине беременности - это один из симптомов гестоза. Затем присоединяются отеки, перепады артериального давления.

• суточный анализ мочи на белок;
• регулярное посещение доктора;
• контроль за давлением;
• питание, усиленное витаминными комплексами;
• умеренное потребление жидкости;
• отказ от специй и по возможности от соли или уменьшение ее количества до минимума.

С профилактической целью, а также для уменьшения белковых соединений в моче доктор может назначить лекарственные средства на растительной основе или отвары трав, обладающих мочегонным действием.

Лечение и профилактика

Расшифровку анализов следует доверить своему доктору. В случае выявления патологических причин появления белковых веществ в урине необходимую терапию назначает только медицинский работник. Не рекомендуется самостоятельно лечиться и увлекаться нетрадиционными методами. При выявлении причин, не связанных с патологическими процессами, уделяют особое внимание рациону. Важно помнить, что эффективность терапии зависит от своевременной диагностики.

Небольшие количества белка обнаруживаются в суточной моче у здоровых лиц. Однако такие небольшие концентрации его не удается выявить с помощью обычных методов исследования. Выделение более значительных количеств белка, при которых обычные качественные пробы на белок в моче становятся положительными, называются протеинурией. Различают почечную (истинную) и внепочечную (ложную) протеинурию. При почечной протеинурии белок в мочу проникает непосредственно из крови вследствие увеличения фильтрации его клубочками почки или снижения канальцевой реабсорбции.

Почечная (истинная) протеинурия

Почечная (истинная) протеинурия бывает функциональной и органической. Среди функциональной почечной протеинурии наиболее часто наблюдаются следующие ее виды:

Физиологическая протеинурия новорожденных, которая исчезает на 4— 10-й день после рождения, а у недоношенных несколько позже;
- ортостатическая альбуминурия, которая характерна для детей в возрасте 7—18 лет и появляется только в вертикальном положении тела;
- транзиторная (инсультная) альбуминурия, причиной которой могут быть различные заболевания органов пищеварения, тяжелая анемия, ожоги, травмы или физиологические факторы: тяжелая физическая нагрузка, переохлаждение, сильные эмоции, обильная, богатая белком пища и др.

Органическая (почечная) протеинурия наблюдается вследствие прохождения белка из крови через поврежденные участки эндотелия почечных клубочков при заболеваниях почек (гломерулонефрит, нефроз, нефросклероз, амилоидоз, нефропатия беременных), расстройствах почечной гемодинамики (почечная венная гипертензия, гипоксия), трофических и токсических (в том числе лекарственных) воздействиях на стенки капилляров клубочков.

Внепочечная (ложная) протеинурия

Внепочечная (ложная) протеинурия, при которой источником белка в моче является примесь лейкоцитов, эритроцитов, бактерий, клеток уротелия. наблюдается при урологических заболеваниях (мочекаменная болезнь, туберкулез почек, опухоли почки и мочевых путей и др.).

Определение белка в моче

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты).

Среди качественных методов определения бедка в моче наибольшее распространение получили унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой и кольцевая проба Геллера.

Унифицированная проба с сульфасалициловой кислотой проводится следующим образом. В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В одну из них прибавляют 6—8 капель 20 % раствора сульфасалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки. Помутнение мочи в пробирке с сульфасалициловой кислотой указывает на наличие белка. Перед исследованием необходимо определить реакцию мочи, и если она щелочная, то подкислить 2—3 каплями 10 % раствора уксусной кислоты.

Проба Геллера основана на том, что при наличии белка в моче на границе азотной кислоты и мочи происходит его коагуляция и появляется белое кольцо. В пробирку наливают 1—2 мл 30 % раствора азотной кислоты и осторожно по стенке пробирки наслаивают точно такое же количество профильтрованной мочи. Появление белого кольца на границе двух жидкостей указывает на наличие белка в моче. Следует помнить, что иногда белое кольцо образуется при наличии большого количества уратов, но в отличие от белкового кольца оно появляется несколько выше границы между двумя жидкостями и растворяется при нагревании [Плетнева Н.Г., 1987].

Из количественных методов наиболее часто применяются:

1) унифицированный метод Брандберга—Робертса—Стольникова, в основу которого положена кольцевая проба Геллера;
2) фотоэлектроколориметрический метод количественного определения белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфасалициловой кислоты;
3) биуретовый метод.

Выявление белка в моче упрощенным ускоренным методом проводят колориметрическим методом с помощью индикаторной бумаги, которую выпускают фирмы «Lachema» (Словакия), «Albuphan», «Ames» (Англия), «Albustix», «Boehringer» (Германия), «Comburtest» и др. Метод заключается в погружении в мочу специальной бумажной полоски, пропитанной тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером, которая меняет свой цвет от желтого до синего в зависимости от содержания белка в моче. Ориентировочно концентрацию белка в исследуемой моче определяют с помощью стандартной шкалы. Для получения правильных результатов необходимо соблюдать следующие условия. рН мочи должна быть в пределах 3,0—3,5; при слишком щелочной моче (рН 6,5) будет получен ложноположительный результат, а при слишком кислой моче (рН 3,0) — ложноотрицательный.

Бумага должна находиться в контакте с исследуемой мочой не дольше, чем указано в инструкции, в противном случае тест даст ложноположительную реакцию. Последнюю также наблюдают и при содержании в моче большого количества слизи. Чувствительность различных видов и серий бумаги может быть различной, поэтому к количественной оценке белка в моче этим методом следует относиться осторожно. Определение его количества в суточной моче при помощи индикаторной бумаги невозможно [Плетнева Н.Г., 1987]

Определение суточной протеинурии

Существует несколько способов определения количества белка, выделившегося с мочой за сутки. Наиболее простым является метод Брандберга —Робертса—Стольникова.

Методика. 5-10 мл тщательно перемешанной суточной мочи наливают в пробирку и осторожно по стенкам ее добавляют 30 % раствор азотной кислоты. При наличии белка в моче в количестве 0,033 % (т.е. 33 мг на 1 л мочи) через 2-3 мин появляется тонкое, но четко видимое белое кольцо. При меньшей его концентрации проба отрицательная. При большем содержании белка в моче его количество определяют путем многократных разведений мочи дистиллированной водой до тех пор, пока не перестанет образовываться кольцо. В последней пробирке, в которой еще видно кольцо, концентрация белка будет составлять 0,033 %. Умножив 0,033 на степень разведения мочи, определяют содержание белка в 1 л неразведенной мочи в граммах. Затем рассчитывают содержание белка в суточной моче по формуле:

К=(х·V)/1000

Где К — количество белка в суточной моче (г); х — количество белка в 1 л мочи (г); V — количество мочи, выделенное за сутки (мл).

В норме в течение суток с мочой выделяется от 27 до 150 мг (в среднем 40—80 мг) белка.

Указанная проба позволяет определить в моче только мелкодисперсные белки (альбумины). Более точные количественные методы (колориметрический метод Кьельдаля и др.) довольно сложны и требуют специальной аппаратуры.

При почечной протеинурии с мочой выделяются не только альбумины, но и другие виды белка. Нормальная протеинограмма (по Зейцу и соавт., 1953) имеет следующее процентное содержание: альбуминов — 20 %, α 1 -глобулинов — 12 %, α 2 -глобулинов — 17 %, γ-глобулинов — 43 % и β-глобулинов — 8 %. Отношение альбуминов к глобулинам изменяется при различных заболеваниях почек, т.е. нарушается количественное соотношение между белковыми фракциями.

Наиболее распространенными методами фракционирования уропротеинов являются следующие: высаливание нейтральными солями, электрофоретическое фракционирование, иммунологические методы (реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини, иммуноэлектрофоретический анализ, преципитационный иммуноэлектрофорез), хроматография, гель-фильтрация, а также ультрацентрифугирование.

В связи с внедрением методов фракционирования уропротеинов, основанных на изучении электрофоретической подвижности, вариабильности молекулярной массы, размеров и формы молекул уропротеинов, появилась возможность выделять характерные для того или иного заболевания типы протеинурии, изучать клиренсы индивидуальных плазменных белков. К настоящему времени в моче идентифицировано свыше 40 плазменных белков, В том числе в нормальной моче 31 плазменный белок .

Селективная протеинурия

В последние годы появилось понятие селективности протеинурии. В 1955 г. Hardwicke и Squire сформулировали понятие «селективная» и «неселективная» протеинурия, определив, что фильтрация плазменных белков в мочу подчиняется определенной закономерности: чем больше молекулярная масса белка, экскретируемого в мочу, тем меньше его клиренс и тем ниже концентрация его в окончательной моче. Протеинурия, соответствующая этой закономерности, является селективной в отличие от неселективной, для которой характерным является извращение выведенной закономерности.

Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи с использованием методов электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле. По результатам этих методов исследования можно судить о селективности протеинурии.

По данным В.С.Махлиной (1975), наиболее оправданным является определение селективности протеинурии путем сравнения клиренсов 6—7 индивидуальных белков плазмы крови (альбумина, транеферрина, α 2 - макроглобулина, IgA, IgG, IgM) с использованием точных и специфичных количественных иммунологических методов реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини, иммуноэлектрофоретического анализа и преципитального иммуноэлектрофореза. Степень селективности протеинурии определяют по индексу селективности, представляющего собой отношение сравниваемого и эталонного белков (альбумина).

Изучение клиренсов индивидуальных плазменных белков позволяет получить достоверные сведения о состоянии фильтрационных базальных мембран клубочков почки. Связь между характером экскретируемых в мочу белков и изменениями базальных мембран клубочков настолько выражена и постоянна, что по уропротеинограмме можно косвенно судить о патофизиологических изменениях в клубочках почек. В норме средний размер пор гломерулярной базальной мембраны составляет 2,9—4 А° НМ, которые могут пропускать белки, имеющие молекулярную массу до 10 4 (миоглобулин, кислый α 1 - гликопротеин, легкие цепи иммуноглобулинов, Fc и Fab — фрагменты IgG, альбумин и трансферрин).

При гломерулонефрите, нефротическом синдроме размеры пор в базальных мембранах клубочков увеличиваются, в связи с чем базальная мембрана становится проницаемой для белковых молекул большого размера и массы (церулоплазмин, гаптоглобин, IgG, IgA и др.). При крайней степени повреждения клубочков почек в моче появляются гигантские молекулы белков плазмы крови (α 2 -макроглобулин, IgM и β 2 -липопротеин).

Определяя белковый спектр мочи, можно сделать заключение о преимущественном поражении тех или иных участков нефрона. Для гломерулонефрита с преимущественным поражением гломерулярных базальных мембран характерно наличие в моче крупно- и среднемолекулярных белков. Для пиелонефрита с преимущественным поражением базальных мембран канальцев характерны отсутствие крупномолекулярных и наличие повышенных количеств средне- и низкомолекулярных белков.

β 2 -Микроглобулин

Помимо общеизвестных белков, таких как альбумин, иммуноглобулины, липопротеины. фибриноген, трансферрин, в моче содержатся плазменные белки-микропротеины, среди которых клинический интерес представляет β 2 -микроглобулин, открытый Berggard и Bearn в 1968 г. Имея низкую молекулярную массу (относительная молекулярная масса 1800), он свободно проходит через клубочки почки и почти полностью реабсорбируется в проксимальных канальцах. Это позволяет использовать количественное определение β 2 -микроглобулина в крови и моче для определения клубочковой фильтрации и способности почек к резорбции протеинов в проксимальных канальцах.

Концентрацию этого белка в плазме крови и моче определяют радиоиммунологическим методом с помощью стандартного набора «Phade-bas β 2 -mikroiest» (фирма «Pharmaсia», Швеция). В сыворотке крови здоровых людей содержится в среднем 1,7 мг/л (колебания от 0,6 до 3 мг/л), в моче — в среднем 81 мкг/л (максимально 250 мкг/л) β 2 -микроглобулина. Превышение его в моче свыше 1000 мкг/л — явление патологическое. Содержание β 2 -микроглобулина в крови увеличивается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением клубочковой фильтрации, в частности при остром и хроническом гломерулонефрите, поликистозе почек, нефросклерозе, диабетической нефропатии, острой почечной недостаточности.

Концентрация β 2 -микроглобулина в моче повышается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением реабсорбционной функции канальцев, что приводит к увеличению экскреции его с мочой в 10—50 раз, в частности, при пиелонефрите, ХПН, гнойной интоксикации и др. Характерно, что при цистите в отличие от пиелонефрита не наблюдается увеличения концентрации β 2 -микроглобулина в моче, что может быть использовано для дифференциальной диагностики этих заболеваний. Однако при интерпретации результатов исследования надо учитывать, что любое повышение температуры всегда сопровождается увеличением экскреции β 2 -микроглобулина с мочой.

Средние молекулы крови и мочи

Средние молекулы (СМ), иначе называемые белковыми токсинами, представляют собой вещества с молекулярной массой 500—5000 дальтон. Физическая структура их неизвестна. В состав СМ входят по меньшей мере 30 пептидов: окситоцин, вазопрессин, ангиотензин, глюкагон, адренокортикотропный гормон (АКТГ) и др. Избыточное накопление СМ наблюдается при снижении функции почек и содержании в крови большого количества деформированных белков и их метаболитов. Они обладают разнообразным биологическим действием и нейротоксичны, вызывают вторичную иммунодепрессию, вторичную анемию, угнетают биосинтез белка и эритропоэз, тормозят активность многих ферментов, нарушают течение фаз воспалительного процесса.

Уровень СМ в крови и моче определяют скрининговым тестом, а также путем спектрофотометрии в ультрафиолетовой зоне по длине волны 254 и 280 мм на спектрофотометре ДИ-8Б, а также динамической спектрофотометрии с компьютерной обработкой в диапазоне волн 220—335 нм на том же спектрометре фирмы Beckman. За норму принимают содержание СМ в крови, равное 0,24 ± 0,02 усл. ед., а в моче — 0,312 ± 0,09 усл. ед.
Будучи нормальными продуктами жизнедеятельности организма, они удаляются из него в норме ночками путем гломерулярной фильтрации на 0,5 %; 5 % их утилизируется другим путем. Все фракции СМ подвергаются канальцевой реабсорбции.

Неплазменные (тканевые) уропротеины

Кроме белков плазмы крови, в моче могут быть неплазменные (тканевые) протеины. По данным Buxbaum и Franklin (1970), неплазменные белки составляют приблизительно 2/3 всех биоколлоидов мочи и значительную часть уропротеинов при патологической протеинурии. Тканевые белки попадают в мочу непосредственно из почек или органов, анатомически связанных с мочевыми путями, или попадают из других органов и тканей в кровь, а из нее через базальные мембраны клубочков почки — в мочу. В последнем случае экскреция в мочу тканевых протеинов происходит аналогично выведению плазменных белков различной молекулярной массы. Состав неплазменных уропротеинов чрезвычайно разнообразен. Среди них гликопротеины, гормоны, антигены, ферменты (энзимы).

Тканевые протеины в моче выявляют с помощью обычных методов белковой химии (ультрацентрифугирование, гель-хроматография, различные варианты электрофореза), специфических реакций на ферменты и гормоны и иммунологических методов. Последние позволяют также определить концентрацию неплазменного уропротеина в моче и в ряде случаев определить тканевые структуры, ставшие источником его появления. Основным методом выявления в моче неплазменного белка является иммунодиффузионный анализ с антисывороткой, полученной иммунизацией экспериментальных животных мочой человека и истощенной (адсорбированной) в последующем белками плазмы крови.

Исследование ферментов в крови и моче

При патологическом процессе наблюдаются глубокие нарушения жизнедеятельности клеток, сопровождающиеся выходом внутриклеточных ферментов в жидкостные среды организма. Энзимодиагностика базируется на определении ряда ферментов, выделившихся из клеток пораженных органов и не свойственных сыворотке крови.
Исследования нефрона человека и животных показали, что в отдельных его частях имеется высокая ферментативная дифференциация, тесно связанная с функциями, которые выполняет каждый отдел. В клубочках почки содержится относительно небольшое количество различных энзимов.

Клетки почечных канальцев, особенно проксимальных отделов, содержат максимальное количество энзимов. Высокая их активность наблюдается в петле Генле, прямых канальцах и собирательных трубочках. Изменения активности отдельных энзимов при различных заболеваниях почек зависят от характера, остроты и локализации процесса. Они наблюдаются до появления морфологических изменений в почках. Поскольку содержание различных ферментов четко локализовано в нефроне, определение того или иного фермента в моче может способствовать топической диагностике патологического процесса в почках (клубочки, канальцы, корковый или мозговой слой), дифференциальной диагностике почечных заболеваний и определению динамики (затухание и обострение) процесса в почечной паренхиме.

Дли дифференциальной диагностики заболеваний органов мочеполовой системы применяют определение активности в крови и моче следующих ферментов: лактатдегидрогеназы (ЛДГ), лейцинаминопептидазы (ЛАП), кислой фосфатазы (КФ), щелочной фосфатазы (ЩФ), β-глюкуронидазы, глютамино-щавелевоуксусной трансаминазы (ГЩТ), альдолазы, трансамидиназы и др. Активность ферментов в сыворотке крови и в моче определяют с помощью биохимических, спектрофотометрических, хроматографических, флуориметрических и хемилюминесцентных методов.

Энзимурия при заболеваниях почек более выражена и закономерна, чем энзимемия. Она особенно сильно выражена в острой стадии заболевания (острый пиелонефрит, травма, распад опухоли, инфаркт почки и т.д.). При этих заболеваниях обнаруживается высокая активность трансамидиназы, ЛДГ, ЩФ и КФ, гиалуронидазы, ЛАП, а также таких неспецифических энзимов, как ГЩТ, каталаза [Полянцева Л.Р., 1972].

Селективная локализация ферментов в нефроне при обнаружении ЛАП и ЩФ в моче позволяет с уверенностью говорить об острых и хронических заболеваниях почек (острая почечная недостаточность, некроз почечных канальцев, хронический гломерулонефрит) [Шеметов В.Д., 1968]. По данным А.А.Карелина и Л.Р.Полянцевой (1965), трансамидиназа содержится лишь в двух органах — почке и поджелудочной железе. Она является митохондриальным ферментом почек и в норме в крови и моче отсутствует. При различных заболеваниях почек трансамидиназа появляется в крови и в моче, а при поражении поджелудочной железы — только в крови.

Дифференциальным тестом в диагностике гломерулонефрита и пиелонефрита Krotkiewski (1963) считает активность ЩФ в моче, повышение которой более характерно для пиелонефрита и диабетического гломерулосклероза, чем для острого и хронического нефрита. Нарастающая в динамике амилаземия при одновременном снижении амилазурии может указывать на нефросклероз и сморщивание почки, ЛАП имеет наибольшее значение при патологических изменениях в клубочках и извитых канальцах почки, поскольку содержание ее в этих отделах нефрона более высокое [Шепотиновский В.П. и др., 1980]. Для диагностики волчаночного нефрита рекомендуется определение β-глюкуронидазы и КФ [Приваленко М.Н. и др., 1974].

При оценке роли энзимурии в диагностике заболеваний почек следует учитывать следующие положения. Энзимы, будучи по своей природе белками, при малой молекулярной массе могут проходить через неповрежденные клубочки, определяя так называемую физиологическую энзимурию. Среди этих энзимов постоянно определяются в моче α-амилаза (относительная молекулярная масса 45 ООО) и уропепсин (относительная молекулярная масса 38000).

Наряду с низкомолекулярными энзимами в моче здоровых лиц могут быть обнаружены в небольшой концентрации и другие энзимы: ЛДГ, аспартат- и аланинаминотрансферазы, ЩФ и КФ, мальтаза, альдолаза, липаза, различные протеазы и пептидазы, сульфатаза, каталаза, рибонуклеаза, пероксидаза .

Высокомолекулярные энзимы с относительной молекулярной массой больше 70000-100000, по мнению Richterich (1958) и Hess (1962), могут проникать в мочу лишь при нарушении проницаемости клубочкового фильтра. Нормальное содержание ферментов в моче не позволяет исключить патологический процесс в почке при окклюзии мочеточника. При эпзимурии возможен выход энзимов не только из самих почек, но и из других паренхиматозных органов, клеток слизистых оболочек мочевых путей, предстательной железы, а также форменных элементов мочи при гематурии или лейкоцитурии.

Большинство энзимов неспецифично по отношению к почке, поэтому откуда происходят энзимы, обнаруженные в моче здоровых и больных, установить трудно. Однако степень энзимурии даже дли неспецифичных энзимов при поражении почек бывает выше нормы или той, которая наблюдается при заболеваниях других органов. Более ценную информацию может дать комплексное исследование в динамике ряда ферментов, особенно органоспецифичных, таких как трансаминаза.

В решении вопроса о почечном происхождении энзима в моче помогает исследование изоэнзимов с выявлением фракций, типичных для изучаемого органа. Изоэнзимы — это энзимы, изогенные по действию (катализируют одну и ту же реакцию), но гетерогенные по химической структуре и другим свойствам. Каждая ткань имеет характерный для нее изоэнзимный спектр. Ценными методами разделения изоэнзимов являются электрофорез в крахмальном и полиакриламидном геле, а также ионообменная хроматография.

Белок Бенс-Джонса

При миеломной болезни и макроглобулинемии Вальденстрема в моче обнаруживают белок Бенс-Джонса. Метод обнаружения названного белка в моче основан на реакции термопреципитации. Применявшиеся ранее методы, с помощью которых оценивают растворение этого белка при температуре 100 °С и повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами.

Более достоверно выявление этого парапротеина путем осаждения его при температуре 40 -60 °С. Однако и в этих условиях осаждения может не произойти в слишком кислой (рН < 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН > 6,5) моче, при низкой ОПМ и низкой концентрации белка Бенс-Джонса. Наиболее благоприятные условия для его осаждения обеспечивает методика, предложенная Patnem: 4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл 2 М ацетатного буфера рН 4,9 и согревают 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белка Бенс-Джонса в течение первых 2 мин появляется выраженный осадок.

При концентрации белка Бенс-Джонса меньше 3 г/л проба может быть отрицательной, но на практике это встречается крайне редко, поскольку его концентрация в моче, как правило, более значительна. На пробы с кипячением нельзя вполне полагаться. С полной достоверностью он может быть обнаружен в моче иммуно-электрофоретическим методом с использованием специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

Белок в моче: методы определения

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора .

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,

Полуколичественные,

Количественные.

Качественные методы

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 - 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).

Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.

Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.

Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

кольцевая проба Геллера ,

проба с 15 – 20% сульфосалициловой кислотой ,

проба с кипячением, и другие.

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

Полуколичественные методы

К полуколичественным методам относятся:

метод Брандберга-Робертса-Стольникова ,

определение белка в моче с помощью диагностических тест-полосок.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины . Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Количественные методы

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;

значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;

должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;

обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;

быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);

обладать приемлемой стоимостью;

быть легко адаптируемым к автоанализаторам;

результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

Турбидиметрические методы

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),

определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),

определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Колориметрические методы

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

К ним относятся:

биуретовая реакция,

метод Лоури,

методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:

Понсо S (Ponceau S),

Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)

пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул: протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L; протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S; протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L; протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B; протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S; протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L; где B – результат измерения с Кумасси G-250; L - результат измерения с реактивом Лоури; P - результат измерения с молибдатом пирогаллола; S - результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

Литература:

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, "Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии", Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.

А. В. Козлов, "Протеинурия: методы ее выявления", лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.

В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», - Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.

В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова - Методы определения белка в моче (обзор литературных данных)

Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, "Медицина", 197

В норме белок выводится с мочой в незначительном количестве (20–150 мг/сутки), такие концентрации находятся за пределами чувствительности общепринятых рутинных методов, поэтому в моче здорового человека белок, как правило, не обнаруживается. Протеинурия считается установленной, если выделение белка превышает 300 мг/сутки.

Различают физиологическую и патологическую протеинурию. При физиологической (функциональной) протеинурии повышенное выделение белка с мочой может быть обусловлено некоторыми заболеваниями и определенными физиологическими состояниями. Содержание белка в моче у пациентов нормализуется после устранения причин такой протеинурии, к которым относят физическую нагрузку, стресс, гипертермию, охлаждение, застойную сердечную недостаточность, беременность.

Патологическая протеинурия не всегда связана с заболеваниями почек, различают преренальную, ренальную и постренальную формы (Табл.).

Преренальная протеинурия возникает вследствие поступления в мочу через неповрежденный почечный фильтр циркулирующих в крови в относительно высокой концентрации патологических белков с низкой ММ. Увеличение концентрации таких белков в крови наблюдается при повышенном синтезе легких цепей иммуноглобулинов, внутрисосудистом гемолизе, разрушении тканей.

Ренальная протеинурия обусловлена поражением клубочков и/или канальцев почек.

Гломерулярная (клубочковая) протеинурия развивается вследствие повреждения клубочкового фильтра, в результате нарушается фильтрация и диффузия в клубочках. В зависимости от степени нарушения функции клубочков различают селективную и неселективную протеинурии, при последней в моче наряду с низкомолекулярными появляются практически все высокомолекулярные белки.

При тубулярной (канальцевой) протеинурии в моче возрастает количество низкомолекулярных белков из-за нарушения механизмов их реабсорбции в проксимальных канальцах. Характерным является выведение с мочой белков низкой ММ (менее 40 КДа). Помимо острых и хронических заболеваний почек, эта форма встречается при отравлении тяжелыми металлами, токсическими соединениями, приеме нефротоксических препаратов. Основным маркером развития тубулярной протеинурии является повышенное содержание в моче β2-микроглобулина

Постренальная протеинурия проявляется при наличии воспалительных процессов в мочевыводящих путях и половых органах (при циститах, пиелитах, простатитах, уретритах, вульвовагинитах) или при злокачественных процессах с той же локализацией. Данный тип протеинурии диагностируется с помощью микроскопических методов, позволяющих выявить в моче опухолевые или воспалительные клетки.

Определение концентрации белка в моче представляет определенные трудности: неоднородный состав белков диктует необходимость выбора метода, позволяющего одновременно определять все белки мочи. Определение общего белка является некоторым компромиссом, так как пока не существует метода, который позволил быопределить весь спектр уропротеинов, в состав которого могут входить различные белки сыворотки крови и тканей. В настоящее время для лабораторной диагностики протеинурии используют качественные, полуколичественные и количественные методы.

Название		Причина	Белки в моче
Преренальная форма Протеинурия переполнения		Высокие уровни синтеза парапротеинов (миеломная болезнь и др. амилоидозы)	Белок Бенс-Джонса и др. парапротеины
		Усиление распада белка тканей (выраженный гемолиз, рабдомиолиз, миопатии, лейкоз)	Гемоглобин, миоглобин, лизоцим
Ренальная форма	Гломерулярная или клубочковая	Нарушение избирательной проницаемости гломерулярного фильтра	Селективная протеинурия – белки с ММ только менее 150 кДа; неселективная протеинурия – любые белки, в т.ч. с ММ более 150 кДа
	Тубулярная или канальцевая	Нарушение реабсорбции в канальцах	Выделение низкомолекулярных белков (ММ менее 40 кДа)
	Смешанная	Нарушение избирательной проницаемости гломерулярного фильтра и реабсорбции в канальцах	Выделение низко- и высокомолекулярных белков
Постренальная форма		Попадание воспалительного экссудата в мочу при заболеваниях мочевыводящих путей мочевого пузыря, половых органов	Белок Тамма-Хорсвалла, IgA, белки плазмы крови

Показания к исследованию

• Скрининг поражения почек (после трансплантации почки, при гломерулонефрите, пиелонефрите и др.);
• артериальная гипертензия;
• отравление тяжелыми металлами, нефротоксичными препаратами;
• системные заболевания (цирроз, саркоидоз и др.);
• инфекционные заболевания;
• беременность.

Метод исследования:

Качественные методы для обнаружения белка в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. К качественным методам определения белка в моче относятся: кольцевая проба Геллера, проба с 15–20% сульфосалициловой кислотой, проба с кипячением. Методы качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты.

Полуколичественные методы в настоящее время реализованы преимущественно методами сухой химии в форме диагностических полосок (тест-полосок) с оценкой результата визуально или с помощью анализаторов мочи. Для полуколичественного определения белка в моче в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий, обладающий большей чувствительностью по отношению к альбумину по сравнению с другими белками – глобулинами, мукопротеинами, гемоглобином и белком Бенс-Джонсона. Это свойство полосок делает их пригодными к обнаружению селективной протеинурии, когда практически весь белок представлен альбумином, но обуславливает получение ложноотрицательных результатов при других видах протеинурии.

Количественные методы определения общего белка в моче включают турбидиметрические и нефелометрические, а также колориметрические .

Турбидиметрические и нефелометрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния (нефелометрия), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрия).

Колориметрические методы основаны на специфических реакциях белков с хромогенами, интенсивность образуемой окраски пропорциональна концентрации исследуемого вещества.

При получении повышенных значений белка в моче с использованием качественных или полуколичественных методов для определения тяжести и установления механизма возникновения протеинурии целесообразно не только определить его количественное содержание, но и оценить изменения белкового спектра мочи, используя метод электрофореза или определить концентрацию отдельных белков мочи иммунохимическими методами.

Повышенные значения

• Нарушение гломерулярной фильтрации;
• нарушение тубулярной реабсорбции;
• миеломная болезнь, амилоидоз;
• макроглобулинемия Вальденстрема;
• моноцитарный лейкоз;
• ожоги, внутрисосудистый гемолиз, рабдомиолиз;
• инфекционные процессы, повышенная температура тела;
• острый панкреатит, цирроз, гепатиты;
• системные заболевания;
• злокачественные новообразования или воспаление мочевыводящих путей, половых органов;
• застойная сердечная недостаточность;
• отравление тяжелыми металлами;
• применение аминогликозидов, нефротоксичных препаратов;
• переохлаждение.

Нормальные показатели: белок в норме в моче содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными качественными реакциями. Верхняя граница нормы белка в моче – 0,033 г/л. Если содержание белка выше этого значения, то качественные пробы на белок становятся положительными.

Клиническое значение определения:

Появление белка в моче называется протеинурия. Протеинурии могут быть ложными и почечными. Экстраренальные протеинурии могут быть при наличии примесей белкового происхождения из половых органов (вагинитах, уретритах и др.), количество белка при этом незначительно – до 0,01 г/л. Почечные протеинурии могут быть функциональными (при переохлаждении, физических нагрузках, лихорадке) и органическими - при гломерулонефрите, пиелонефрите, нефрите, нефрозах, почечной недостаточности. При почечных протеинуриях содержание белка может быть от 0,033 до 10 – 15 г/л, иногда выше.

Качественное определение.

Принцип метода : основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка.

Обнаружение белка в моче с 20% сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 20% р-р сульфосалициловой кислоты. Оборудование: темный фон.

Ход исследования:

2. В 2 пробирки одинакового диаметра наливают по 2 мл подготовленной мочи. 1 пробирка – контроль, 2 – опыт. В опытную пробирку добавляют 4 капли 20% сульфосалициловой кислоты.

3. Результат отмечают на темном фоне.

4. При наличии белка, моча в опытной пробирке мутнеет.

Качественное определение белка в моче тест – полосками.

Для выявления протеинурий используют различные монотест – полоски: Альбуфан, Альбустикс, Биофан Е и политесты: Трискан, Нонафан и др.

Количественное определение.

Обнаружение белка в моче по методу Робертса – Стольникова.

Принцип метода : основан на том, что белок под действием неорганических кислот коагулирует (становится видимым). Степень помутнения зависит от количества белка (т.е. кольцевая проба Геллера). При концентрации белка в моче 0,033 г/л к концу 3 минуты после наслаивания мочи появляется тонкое нитевидное белое кольцо.

Реактивы : 50% р-р азотной кислоты или реактив Робертса (98 частей насыщенного раствора поваренной соли и 2 части концентрированной соляной кислоты) или реактив Ларионовой (98 частей насыщенного р-ра поваренной соли и 2 части концентрированной азотной кислоты).

Оборудование: темный фон.

Ход исследования:

1. Требования к моче: моча должна быть кислой (или слабокислой) рН, должна быть прозрачной, для этого мочу центрифугируют. Щелочную мочу подкисляют до слабокислой реакции среды, используя для контроля индикаторную бумагу.

2. В пробирку наливают 2 мл 50% р-ра азотной кислоты или один из реактивов, затем осторожно по стенке пробирки с помощью пипетки наслаивают такой же объем подготовленной мочи

3. Пробу оставляют на 3 минуты

4. Через 3 минуты отчитывают результат. Результат отмечают на темном фоне в проходящем свете. Если кольцо широкое, компактное, то мочу разводят дистиллированной водой и вновь наслаивают на реактив.

5. Мочу разводят до тех пор, пока через 3 минуты не образуется тонкое нитевидное кольцо.

С = 0,033г/л х степень разведения.